Conteo Celular con Hematocitómetro

Uso Elemental del Hematocitómetro

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Camara Neubauer Fig 4. Detalle de la rejilla de una cámara de Neubauer Improved.

 

 

Conteo Celular, paso a paso

PASO 1. Preparación de la muestra.

Camara Neubauer Fig 5. Introducción de la muestra en la cámara de Neubauer

Dependiendo del tipo de muestra a medir, se ha de habrá de prepararar una muestra con una concentración apta para su recuento.

Intentaremos que la muestra tenga una concentración en torno a 106 (1 millón) aplicando las diluciones correspondientes.

Por debajo de 250.000 células / ml (2,5 * 105  )la cantidad de células contadas no es suficiente para poder dar una estimación lo suficientemente fiable de la concentración celular 1

La concentración óptima para conteo en hematocitómetro es de 1 millón de células por ml = 106 células /ml

Por encima de 2,5 millones (2,5 * 106) la probabilidad de cometer errores de conteo crece demasiado, y también el tiempo y esfuerzo necesario para realizar un recuento con fiabilidad. Por encima de esta concentración es conveniente diluir la muestra para acercar la concentración al rango óptimo.

PASO 2. Introducción de la muestra en la cámara de Neubauer

Se toman 10 uL de la mezcla preparada en el paso 1 con la micropipeta.

 

  1. Se coloca un cubreobjetos sobre la cámara de Neubauer, y se coloca en posición horizontal sobre la mesa, en un lugar donde nos sea cómodo pipetear.
  2. se introduce una punta desechable en el extremo de la micropipeta,
  3. se ajusta la micropipeta para succionar 10 uL de líquido. Generalmente este ajuste se realiza guirando el botón del embolo para seleccionar el volumen deseado.
  4. se introduce la punta de la micropipeta en la muestra
  5. Se pulsa el pistón o embolo superior de la pipeta suavemente hasta que se siente como el pistón llega al final de su recorrido.
  6. Se saca la punta de la pipeta de la muestra, y siempre manteniéndola en posición vertical se lleva hasta la cámara de Neubauer.
  7. Se coloca la punta de la pipeta en el borde del cubreobjetos, en el extremo de la cámara de Neubauer. Se trata de dejar que el líquido penetre entre la cámara y el cubreobjetos desde el lateral, por capilaridad.
  8. Se suelta el pistón suavemente mientras se supervisa que el líquido está entrando correctamente y de forma uniforme en la cámara.(ver Fig.5)
  9. En caso de que aparezcan burbujas, el cubreobjetos se haya movido o algo no haya salido bien, repetir la operación
Ya tenemos la cámara de Neubauer cargada, lista para el recuento celular.

Ver
http://www.celeromics.com/conteo-celular-con-concentraciones-bajas.htm, para una  demostración estadística de por qué ocurre esto.
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